Публикация научных статей.
Вход на сайт
E-mail:
Пароль:
Запомнить
Регистрация/
Забыли пароль?
Международный научно-исследовательский журнал публикации ВАК
Научные направления
Поделиться:
Разделы: Медицина
Размещена 30.11.2016. Последняя правка: 30.11.2016.

Экспериментальное обоснование комплексного лечения острой печеночной недостаточности с применением препарата Мориамина у крыс.

Abilov Pulat Melisovich

ассистент

Ташкентский медицинский педиатрический институт

преподаватель

Аннотация:
В данной статье рассматриваются введение крысам препарат CCl4 для создания искусственной модели острой печеночной недостаточности и оценка клинико-биохимических показателей крыс до и после применения препарата Мориамин С-2 в комплексе с комбинированной терапией. Указывается на преимущество препарата Мориамин С-2 по сравнению с контрольной группой, в которой препарат не применялся.


Abstract:
This article focuses on the introduction of the drug in rats CCl4 to create an artificial model of acute liver failure and assessment of clinical and biochemical parameters of rats before and after treatment Moriamin-2 in combination with combination therapy. It points to the advantage of the drug Moriamin C-2 compared with the control group, in which the drug has been applied.


Ключевые слова:
острая печеночная недостаточность; гепатоциты; Мориамин; биохимические показатели.

Keywords:
acute liver failure; hepatocytes; Moriamin; biochemical parameters.


УДК 616.136.41+615.015-08-001.6-599.323.4

На сегодняшний день летальность, по данным ВОЗ,  от острой печеночной недостаточности занимает 3 место в мире после сердечно-сосудистых и онокологических заболеваний. 

Лечение достаточна трудоемка и не всегда достаточно эффективна. На настоящий момент используемые медикаментозные препараты приносят краткосрочный эффект, а предложенные методы трансплантации фетальных гепатоцитов не каждому показаны, трудоемки по методики изготовления и не всегда дают положительный результат. К тому же данный метод требует большой финансовой помощи со стороны пациента.

В связи с этим интерес представляет изучение регенерации печени.  Знание закономерностей восстановительных процессов, происходящих в тканях и органах является необходимой основой для понимания регенераторных процессов.

Известные биологические добавки, такие как Трепел и Сувар не применяются для лечения острой печеночной недостаточности, из-за отсутствия в их составе незаменимых аминокислот.

Конечно, в первую очередь при лечении острой печеночной недостаточности нужно приостановить некроз гепатоцитов.  Для этого устраняют кровотечение, гиповолемию, интоксию и гипоксию.

Для утраченных функций печени в последнее время предложено огромное количество препаратов, однако восстановить утраченные гепатоциты и др клетки (клетки Купфера, клетки Ито, pit-клетки, эндотелиоциты, холангиоциты) они не способны.

Как известно введенные аминокислоты не должны содержать фенилаланин, метионин, триптофан и метионин из-за высокого риска развития энцефалопатии.

Как известно, печень играет огромную роль в белковом обмене. Так, в печени происходит дезаминирование аминокислот с помощью АЛТ и АСТ, также в печени синтезируются компоненты протромбинового комплекса  и другие факторы свертывания крови.. В печени также происходит катаболизм белков с участием ферментов катепсинов дипептидазы, кислой карбоксипептидазы, коллагеназы.

Так в 2006 году были опубликованы рекомендации Европейской ассоциации энерального и парентерального питания по которому даны четкие указания, что при острой печеночной недостаточности важно поддерживать суточную энергетическую потребность исходя из 35-40 ккал на 1кг массы тела, потребность в белках 1,2 -1,5 на 1 кг массы тела.  Также известно, что нарушение синтеза мочевины может привести к тому, что аммиак накапливается в крови, что снижает количество незаменимых аминокислот в крови и в центральной нервной системе, что может развиваться энцефалопатия. Так, в настоящее время в России и в ряде других стран применяется препарат Гепасол­-Нео, который содержит только аминокислоты, и не содержит микроэлементы, электролиты и витамины, хотя есть много других препаратов, содержащих в своем составе и аминокислоты, и электролиты, микроэлементы и витамины. Таким из препаратов является Мориамин С-2.

Как правило, при острой печеночной недостаточности прибавляются синдромы холестаза, синдромы гепатоцитолиза, геморрагического синдрома, гепатолиенального синдрома и синдрома печеночной недостаточности. Не вдаваясь в эти симптомы, можно упомянуть, что при острой печеночной недостаточности клиника проявлений неспецифичны и выявляются на поздних стадиях заболевания, когда наступает цирроз печени или вирусный гепатит.

Так, в Узбекистане заработали скрининговые программы для новорожденных путем тандемной масс-спектрометрии выявлены случаи недостаточности ацил СоА-дегидрогеназы среднецепочных жирных кислот, который является наиболее распространенным дефектом ферментов b-окисления жирных кислот. У многих этих детей в дальнейшем может развиться острая печеночная недостаточность. 

Цель работы.  Изучить основные биохимические показатели крови крыс до и после введения Мориамина.

Материалы и методы.  Была проведена работа на 200 крыс массой 160-200 гр. Все крысы были разделены на 2 группы 1 группа крысы без лечения, 2 группа – крысы леченные Мориамином С-2.

В эксперименте острую печеночную недостаточность получали путем введения половозрелым крысам разведенного в масле в объемном соотношении 1:1 гепатотропного проетктора ССl4 внутрибрюшинно однократно.

Спектр биохимических показателей включал определение в сыворотке крови глюкозы,  общего белка и альбумина, билирубина (непрямого и прямого), а также мочевины, креатинина, активности ферментов (АСТ, АЛТ, щелочной фосфатазы и аммиака.

Эффективность Мориамина сравнивали с контрольной группой, которым препарат не вводили. Мориамин вводили в дозе 0,8 мг/кг внутримышечно через 48 часов после модели ОПН.

В процессе эксперимента были соблюдены принципы о гуманном отношении с  животным в соответствии с Европейской конвенции по защите животных и Всемирного общества защиты животных (WSPA).

Для статистической обработки данных применяли компьютер Pentium IV с программой Exel 2007. Достоверность определяли по критерию Стьюдента-Фишера.

Результаты исследования.

Как показали исследования под действием CCl4 у 88% животных отмечалось вялость, у 50% - снижение болевого барьера, интоксикация – у 90%, кровотечение в паренхиматозные органы – у 60%., гиповолемия – у 80%.

Печень является крупнейшей железой в организме человека и как известно принимает участие в обезвреживании многих токсических продуктов. Также известно. Что печень обладает большой регенераторной способностью. Наиболее важной реакцией детоксикации является конъюгация. Конъюгация ведет к инактивации и повышению выведения через каналы Геринга и далее внепеченочные канальцы образовавшихся продуктов. Обезвреживание происходит за счет соедтнения с глюкороновой или серной кислотой. С помощью конъюгации инактивируются стероидные гормоны, билирубин, желчные кислоты, ароматические углеводороды.

При поражении печени желчные кислоты, индол, ароматические углеводороды, фенол попадают в кровоток за счет того, что нарушена функция фермента гепатоцитов- гликозилтрансферазы и продукты гликолиза вместо того, чтобы пройти в кровь идут в кровеносные сосуды приводя к энцефалопатии и желтухе.

Рис  1. Клетки печени при печеночной недостаточности.

Рис 2. Электронная микрофотография клеток Купфера при острой печеночной недостаточности.

При электронной микроскопии отмечалось разнообразные проявления ишемического повреждения гепатоцитов в виде набухания митохондрий, исчезновения в них крипт, просветления митохондриального матрикса, вакуолизация цистерн шероховатого эндоплазматического ретикулума, исчезновение гранул гликогена. Характерно было также жировая дистрофия и коллапс ретикулярной системы  в зоне некроза, накопление фагосом, продуктов желчных пигментов и липофусциновых включений на обоих полюсах гепатоцитов.

Изменение клеток Купфера характеризовалось резким величением их в просвет синусоидов. Просвет синусоидов был обтурированзвездчатыми ретикулоэндотелиоцитами с фагосомами, сегментоядерные лейкоциты и единичные эритроциты.

Морфологически наблюдалось белковая и жировая дистрофия печеночных клеток, потеря балочной структуры паренхимы печени, интенсивное разрастание соединительной ткани вокруг портальных трактов, узловая трансформация паренхимы печени с формированием ложных долек, разделенных между собой фиброзными тяжами. В соединительнотканных прослойках отмечалось образование шунтурующих сосудов. Наряду с дистрофией, некрозом, фибробластическми процессами, перестройкой печеночных долек наблюдаются признаки слабовыраженной регенераторной активности.  Она выражалась в гипертрофии гепатоцитов и наличии небольшого количества двуядерных клеток при диффузном прорастании паренхимы соединительной тканью и единичных регенераторных гепатом – при образовании ложных долек. Гепатомы состояли из гипертрофированных одно-двуядерных гепатоцитов со светлой цитоплазмой и гиперхромными ядрами. В паренхиме печени выявлялась также компенсаторно-приспособительная пролиферация междольковых желчных протоков. Часто вокруг этих протоков определялись воспалительные инфильтраты, состоящие из лимфоцитов и плазматических клеток.

Встречались клетки с признаками зернистой дистрофии со снижением электронной плотности цитоплазмы, содержащей хлопьевидные глыбки денатуированного белка и клетки с вакуольной или баллонной дистрофией.  

В норме клетки печени непрерывно синтезируют мочевину. В нашей работе при моделировании острой печеночной недостаточности CCl4  приводило к увеличению содержания аммиака в крови в 2,5 раза. Следует также отметить, что в здоровой печени задерживается большое количество аммиака. Что поддерживает низкое содержание его крови. А основным источником аммиака является портально-венозная кровь, которая получает аммиак путем дезаминирования глутамина в результате аминотрансферазных реакций.  Поэтому концентарция аммиака в воротной вене существенно больше, чем в общем кровотоке.

Также нами в качестве комбинированной терапии использовали антибиотики, Дюфалак, который снижает количество аммиака в крови и тем самым снижает риск развития энцефалопатии. Из анитбиотиков мы принимали неомицин, метрогил, ванкомицин, рифаксимин. Дозировка у каждого пациента должна подбираться индивидуально.

Как известно в системе внутрипеченочного обезвреживания аммиака принимают перипортальный и перивенозный гепатоцит. Соответственно, существуют 2 основные системы синтеза мочевины: 1- в перипортальном гепатоците с помощью карбоил-синтетазы и 2 – в перивенозном гепатоците с помощью синтеза глутамина. Так, например, орнитин усваивается митохондриями перипортальных гепатоцитов, где служит метаболитом в образовании мочевины и активирует карбомоилфосфатсинтетазу, фермент, укоряющий синтез мочевины. Также орнитин приводит к увеличению НАДФ, что приводит к увеличению энергетических запасов митохондрий.

Так назначение аминокислот с разветленной цепью (лейцин, изолейцин, валин) оправдало себя за счет предотвращения поступления ложных нейромедиаторов в головной мозг, что послужило применять данные аминокилотные смеси в качестве потенциальной терапии острой печеночной недостаточности.

Для лечения гипоксии, которое является одним из прогрессирующих в худшую сторону факторов острой печеночной недостаточности, применяли оксигенотерапию ( подача 3-4 л в мин), для улучшения энергетических процессов применяли раствор глюкозы (10%), с целью стабилизации клеточных мембран применяли гидрокортизон в дозировке 10-15 мг на 1 кг. 

Таблица 1. Изменение биохимических показателей крови крыс в контрольной группе и в основной гркппе с лечением Мориамином С-2. 

Показатели

Норма

Группы крыс с лечением и без

Контрольная без лечения

Основная с применением Мориамина С-2

Критерий ошибки

1

Глюкоза

8,77±0,50

4,72±0,47

5,40±0,43

P<0,001

2

Общий белок

72,50±1,58

51,44±2,91

58,43±2,01

P<0,015

3

Альбумин

39,81±1,21

22,72±0,91

28,44±2,33

P<0,001

4.

Мочевина

4,19±0,13

9,12±0,41

6,44±0,51

P<0,001

5.

Креатинин

84,10±2,33

125,78±5,70

110,43±4,72

P< 0,001

6.

Общий билирубин

2,73±0.13

6,22±0,26

5,16±0,29

P<0,001

7.

АСТ

104,46±4,88

540,67±42,37

215±42,07

P<0,001

8.

АЛТ

124,48±6,53

233,61±16,04

180,71±13,39

P< 0,001

Таким образом обобщая полученные данные у крыс после затравки CCl4 произошло достоверное изменение биохимических показателей крови у крыс, что является ответной реакцией на введенный препарат. Улучшение биохимических показателей после введения Мориамина, несмотря на то, что он в своем составе содержит фенилаланин и триптофан послужило изменением биохимических показателей в сторону нормы и достоверным улучшение основных клинических и биохимических показателей. Конечно, в практике острая печеночная недостаточность характеризуется как одно из серьезнейших заболеваний, грозящих смертью и одним из предлагаемых вариантов лечения с помощью аминокислотного состава является препарат Мориамин С-2. Конечно используемый препарат и дозировки нужно соблюдать у каждого больного индивидуально. Влияние Мориамина С-2 на развитие энцефалопатии нами будет обсуждено в следующей статье.

Выводы.

  1. Анализ сыворотки крови показал достоверные различия в углеводном, липидном и белковом  обмене в основной группе по сравнению с контрольной.
  2. Применение препарата Мориамин С-2 в контрольной группе достоверно улучшал жизненно-важные показатели в комплексе с комбинированной терапией по сравнению с контрольной.

Результаты исследования являются актуальными и требуют дальнейшего использования их в практической медицине

Библиографический список:

1. Маянский Д. Н., Виссе Э., Декер К. Новые рубежи гепатологии. Новосибирск: Наука, 1992. 264 с.
2. Мороз В. В. Пути коррекции гипоксии при критических состояниях: Дис. д-ра мед. наук в виде науч. докл. М., 1994. - 48 с.
3. Савельев В. А., Кручинский Н. Г. К патогенезу синдрома эндогенной интоксикации // Эндогенные интоксикации: Междунар. симпоз. СПб., 1994.-С. 48.
4. Усынин И. Ф. Роль макрофагов в регуляции метаболических процессов в печени при функциональном напряжении организма. Автореф. дисс. . доктора биол. наук. Новосибирск, 1999.
5. Ямпольский А. Ф. Оптимизация использования мембранных эфферентных методов в лечении ОПН и ПОН. Краснодар, 2005. - 25 с.
6. Bernal W., Auzinger G., Dhawan A., Wendon J. Acute liver failure^/ Lancet.2010.-Vol. 376 (9736).-P. 190-201.




Комментарии пользователей:

Оставить комментарий


 
 

Вверх