Публикация научных статей.
Вход на сайт
E-mail:
Пароль:
Запомнить
Регистрация/
Забыли пароль?
Международный научно-исследовательский журнал публикации ВАК
Научные направления
Поделиться:
Срочные публикации в журналах ВАК и зарубежных журналах Скопус (SCOPUS)!




Статья опубликована в №2 (октябрь) 2013
Разделы: Фармацевтика
Размещена 27.09.2013.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ДУРМАНА ИНДЕЙСКОГО С ЦЕЛЬЮ РАЗРАБОТКИ НОВОГО РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕГО ГЕЛЯ

Слипченко Галина Дмитриевна

к.фарм.наук, доцент

Национальный фармацевтический университет

доцент

Т.Е. КОЛИСНЫК


Аннотация:
Проблема лечения ран, несмотря на множество предложенных методов и препаратов, остается актуальной. При выборе лекарственного препарата для местной терапии ран следует учитывать патогенез раневого процесса. В качестве решения данной проблемы нами предлагается разработка нового ранозаживляющего геля на основе дурмана индейского (DaturainnoxiaMill.) как лекарственного средства, обеспечивающего отток экссудата, а также обладающего антимикробными, противовоспалительными и местноанестезирующими свойствами. На первом этапе исследований нами проведено фитохимическое изучение листьев и семян дурмана индейского в сравнении с официнальным растением Государственной Фармакопеи Украины – дурманом обыкновенным. Полученные результаты позволяют рекомендовать листья дурмана индейского в качестве сырья для создания ранозаживляющего геля.


Abstract:
The problem of treating wounds remains relevant, despite the great variety of the proposed methods and drugs. The pathogenesis of wound healingprocess should be taken into accountfor choosing a drug for topical treatment of wounds. In order to solve this problem we propose the development of a new wound-healing gel based on Daturainnoxiaas a drug providing the outflow of exudate, as well as having anti-microbial, anti-inflammatory and local anesthetic properties. At the first stage of the research we have carried out a phytochemical study of the leaves and seeds of Datura innoxia in comparison to officinal plant of the State Pharmacopoeia of Ukraine –Daturastramonium. The obtained results allow us to recommend the leaves of Datura innoxia as raw material to develop a wound-healing gel.


Ключевые слова:
дурман индейский, тропановые алкалоиды, ранозаживляющий гель

Keywords:
Daturainnoxia, tropane alkaloids, wound-healing gel


Терапия ран и раневой инфекции занимает важное место в современной медицине. Согласно научным представлениям патогенез раневого процесса включает фазу экссудации, фазу пролиферации и фазу эпителизации, что необходимо учитывать при выборе препаратов для местного лечения ран.Так, лекарственные препараты, используемые в экссудативной фазе, должны обладать широким спектром антимикробного действия, осмотическими свойствами, чтобы поглощать раневой экссудат, а также проявлять противовоспалительное и обезболивающее действие. Перспективной лекарственной формой для лечения ран в фазе экссудации являются гели. Посравнениюс мазями, гели обеспечивают интенсивный отток экссудата из глубины раны, имеют pH близкийк pH кожногопокрова, быстроиравномернораспределяютсяпоповерхностипосле нанесения[3, 4].

С целью местного лечения ран широко применяют антимикробные препараты, в частности антибиотики – тетрациклин, левомицетин, гентамицин и др.Их недостатком является ограничение применения из-за индивидуальной непереносимости, а также развитиеустойчивой раневой микрофлоры. Одним из путей решения данной проблемы является использование антимикробных фитопрепаратов на основе календулы, прополиса, зверобоя и др. Для данных лекарственных средствхарактерно сочетание выраженного фармакологического действия с минимальным отрицательным воздействием на организм. К их недостаткам следует отнести отсутствие болеутоляющего действия. В связи с этим особый интерес вызывают растения рода дурман (DaturaL.), обладающие антибактериальными, противогрибковыми, противовоспалительными, а также местноанестезирующими свойствами[5–9].

Поэтому цельюнашей работы является разработка нового ранозаживляющего геля на основе дурмана индейского (DaturainnoxiaMill.). Используядекомпозиционный подход, первымшагом исследований было предварительное фитохимическое изучение листьев и семян дурмана индейского в сравнении с сырьем дурмана обыкновенного − официнального растения Государственной Фармакопеи Украины (ГФУ).

Материалы и методы исследований

Объектами исследований являлись листья и семена видов дурмана индейского и дурмана обыкновенного. Листья заготавливали в июле–августе, а семена – в течение сентября–октября 2012 г.

С помощью общеизвестных химических реакций и методик [1, 2] был проведен сравнительный качественный анализ групп биологически активных веществ (БАВ) листьев и семян дурманов индейского и обыкновенного.

Методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) изучали фенольные соединения и алкалоиды исследуемого сырья.

Для определения фенольных соединений получали водно-спиртовые извлечения по следующей методике. 5,0 г измельченного растительного сырьязаливали 50 мл 50 %-ного спирта и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильникомв течение 20 мин,после чего извлечение охлаждали и фильтровали. 5 мл фильтрата упаривали насухо, сухой остаток растворяли в 0,5 мл 96 % спирта. В качестве неподвижной фазы использовали пластину для ТСХ на алюминиевой фольге Silicagel 60 F254 с толщиной слоя силикагеля 0,20 мм и размерами 20х20 см производства фирмы «Merck». Хроматографирование проводили в системе растворителей н-бутанол – уксусная кислота – вода (4:1:2), в качестве веществ-«свидетелей» использовали фармакопейные стандартные образцы (ФСО) рутина и кверцетина. Полученнуюхроматограмму обрабатывали 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида и анализировали в видимом и ультрафиолетовом (УФ) свете с длинами волн 254 и 366 нм.

Определение алкалоидов осуществляли на хроматографической пластинке на алюминиевой фольге AlugramSil G с толщиной слоя силикагеля 0,20 мм и размерами 20х20 см производства фирмы «Macherey-Nagel» по методике, изложенной в статье Государственной Фармакопеи Украины «Дурмана листья» [2].

Количественное содержание суммы флавоноидов определяли методом спектрофотометрии окрашенных комплексов флавоноидов с алюминияхлоридомв пересчетена рутин [1]. Содержание суммы алкалоидов определяли методом обратной алкалиметрии по методике, изложенной в статье Государственной Фармакопеи Украины «Дурмана листья» [2] впересчете на гиосциамин.

Результаты и обсуждение

В табл. 1 приведены результаты сравнительного анализа сырья дурманов индейского и обыкновенного.

Таблица 1

Сравнительный качественный анализ сырья видов дурмана обыкновенного и индейского

Классы БАВ

Реактивы

Лекарственноерастительное сырье

листья

д. обыкно-венного

семена

д. обыкно-венного

листья

д.индейского

семена

д. индейского

Поли-сахариды

96 % этанол

+

+

+

+

Кумарины

лактонная проба

+

+

+

+

Флавоноиды

цианидиновая реакция

+

+

+

+

раствор железа (III) хлорида

+

+

+

+

Дубильные вещества (конденси-рованные)

раствор железо аммонийных квасцов

+

-

+

-

Алкалоиды

реактив Драгендорфа

+

+

+

+

раствор кислоты пикриновой

+

+

+

+

Примечание: + - присутствие, − - отсутствие классов БАВ в исследуемом сырье.

Качественный состав классов БАВ сырья исследуемых видов оказался практически идентичным. В листьях и семенах обоих видов дурмана установлено наличие полисахаридов, кумаринов, флавоноидов и алкалоидов; в листьях также обнаружены конденсированные дубильные вещества.На рис. 1 приведена схема ТСХ-хроматограммы фенольных соединений сырья изучаемых видов дурмана.

 

 

Рис. 1. Схема ТСХ-хроматограммы фенольных соединений сырья дурманов обыкновенного и индейского. Обозначения: A – рутин, B – кверцетин, C – семена дурмана обыкновенного, D – семена дурмана индейского, E – листья дурмана обыкновенного, F – листья дурмана индейского; 1−15 – обозначения хроматографических зон

 

На ТСХ-хроматограмме фенольных соединений для листьев дурмановобыкновенного и индейского наблюдали по 3 четкие зоны для каждого вида, для семян − 4 и 3 четкие зоны для дурмана обыкновенного и дурмана индейского соответственно. Окрашиваниехроматографических зон в видимом и ультрафиолетовом свете после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида не изменилось, а лишь приобрело более интенсивный характер.

Данныеотносительно рассчитанных величин коэффициента удержания (Rf) и окрашиванияхроматографических зон в видимом и УФ-свете до и после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида для полученной хроматограммы фенольных соединений представлены в табл. 2.

Таблица 2

Величина Rf и окрашивание хроматографических зон для хроматограммы фенольных соединений

Обозначение хроматографических зон на схеме

Rf

Окрашивание хроматографических зон

в видимом свете

в УФ-свете 254 нм

в УФ-свете 366 нм

1

0,39

желтое

темно-зеленое

отсутствует

2

0,83

-//-//-

-//-//-

-//-//-

3

0,93

светло-коричневое

-//-//-

сине-зеленая флуоресценция

4

0,84

-//-//-

-//-//-

-//-//-

5

0,43

-//-//-

голубая флуоресценция

ярко-синяя флуоресценция

6

0,34

светло-желтое

желтая флуоресценция

желто-зеленая флуоресценция

7

0,91

светло-коричневое

темно-зеленое

синяя флуоресценция

8

0,82

-//-//-

-//-//-

-//-//-

9

0,53

-//-//-

-//-//-

-//-//-

10

0,92

желто-зеленое

-//-//-

отсутствует

11

0,84

зелено-коричневое

-//-//-

-//-//-

12

0,47

светло-коричневое

-//-//-

-//-//-

13

0,92

желто-зеленое

-//-//-

-//-//-

14

0,84

зелено-коричневое

-//-//-

-//-//-

15

0,46

светло-коричневое

-//-//-

-//-//-

 

По величине Rf и характерухроматографического поведения в сравнении со стандартным веществом в листьях исследуемых видов идентифицированкверцетин. По характерной флуоресценции в УФ-свете до и после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида можно предположить, что хроматографические зоны 5, 6, 7 относятся к кумаринам и/или гидроксикоричным кислотам.

На рис. 2 приведена схема ТСХ-хроматограммы алкалоидов сырья исследуемых видов дурмана.

 

 

Рис. 2. Схема ТСХ-хроматограммы алкалоидов сырья дурманов обыкновенного и индейского. Обозначения: A – смесь ФСО гиосциамина сульфата и скополаминагидробромида, B – листья дурмана индейского, C – листья дурмана обыкновенного,D – семена дурмана индейского,E – семена дурмана обыкновенного; 1−9 – обозначения хроматографических зон

Данные относительно рассчитанных величин Rf и окрашиванияхроматографических зон в видимом свете представлены в табл. 3.

Таблица 3

ВеличинаRf и окрашиваниехроматографических зон для ТСХ-хроматограммы алкалоидов

Обозначение хроматографической зоны на схеме

Rf

Окрашивание хроматографических зон

после обработки раствором калия йодовисмутата

после обработки раствором натрия нитрита

1

0,76

оранжевое

оранжевое

2

0,26

коричневое

красно-коричневое

3

0,75

оранжевое

оранжевое

4

0,75

оранжевое

оранжевое

5

0,26

коричневое

красно-коричневое

6

0,76

оранжевое

оранжевое

7

0,26

коричневое

красно-коричневое

8

0,77

оранжевое

оранжевое

9

0,28

коричневое

красно-коричневое

 

По результатам проведенного хроматографического анализа на алкалоиды в сырье дурмана обыкновенного и семенах дурмана индейского идентифицированы гиосциамин и скополамин, в листьях дурмана индейского идентифицированскополамин.

Наибольшее количественное содержание суммы флавоноидов установлено в листьях дурманов обыкновенного и индейского (3,87 ± 0,17 % и 3,20 ± 0,15 % соответственно), наименьшее– в семенах видов дурмана обыкновенного и индейского (1,15 ± 0,12 % и 1,03 ± 0,12 % соответственно) .

Наибольшее содержание суммы алкалоидов установлено в сырье дурмана индейского (0,59 ± 0,03 % и 0,41 ± 0,05 % соответственно для семян и листьев) и несколько меньше – в сырье дурмана обыкновенного (0,28 ± 0,03 % и 0,23 ± 0,02 % соответственно для листьев и семян).

Метрологические характеристики проведенных исследований количественного содержания БАВ в сырье изучаемых видов представлены в табл. 4.

Таблица 4

Метрологические характеристики определения БАВ в сырье дурманов обычного и индейского

Растительное сырье

Параметры

n

n

 

s

 

P

t(P,n)

     

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

Определение суммы флавоноидов

Листья дурмана обыкновенного

5

4

3,87

0,19

0,09

0,95

2,13

0,39

0,17

4,37

Семена дурмана обыкновенного

5

4

1,15

0,13

0,06

0,95

2,13

0,26

0,12

10,05

Листья дурмана индейского

5

4

3,20

0,17

0,08

0,95

2,13

0,34

0,15

4,70

Семена дурмана индейского

5

4

1,03

0,14

0,06

0,95

2,13

0,27

0,12

11,93


 

Продолжение табл. 4

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

Определение суммы алкалоидов

Листья дурмана обыкновенного

5

4

0,28

0,03

0,01

0,95

2,13

0,06

0,03

8,89

Семена дурмана обыкновенного

5

4

0,23

0,02

0,01

0,95

2,13

0,05

0,02

8,93

Листья дурмана индейского

5

4

0,41

0,06

0,03

0,95

2,13

0,12

0,05

12,80

Семена дурмана индейского

5

4

0,59

0,04

0,02

0,95

2,13

0,07

0,03

5,52

 

Таким образом, сравнительное фитохимическое изучение сырья видов дурмана обыкновенного и индейского выявило возможность использования сырья дурмана индейского с целью создания новых лекарственных препаратов на его основе.

Выводы

1. Проведено фитохимическое изучение листьев и семян дурмана индейского в сравнении с аналогичным сырьем официнального растения ГФУ – дурмана обыкновенного.

2. Качественное сравнение состава БАВ объектов исследования показало их подобность. С помощью методов ТСХ из фенольных соединений идентифицированкверцетин в листьях исследуемых видов, из алкалоидов определеныгиосциамин  и скополаминв сырье дурмана обыкновенного и семенах дурмана индейского, а также в листьях дурмана индейского – скополамин.

3. По результатам количественного определения отдельных групп БАВ максимальное содержание суммы флавоноидов установлено для листьев дурманов обыкновенного и индейского и наименьшее– для семян обоих видов. Содержание суммы алкалоидов наибольшее для семян и листьев дурмана индейского, и меньшее –для сырья дурмана обыкновенного.

4. На основании проведенных исследований определено перспективное сырье для создания нового ранозаживляющего препарата в форме геля – листья дурмана индейского, ввиду высокого содержания БАВ, а также доступной сырьевой базы, что позволит создать эффективный и экономически целесообразный препарат на основе данного сырья.

Библиографический список:

1. Государственная фармакопея СССР XI издание. Вып. 1, 2. – М.: Медицина, 1987, 1990. – 335 с., 400 с.
2. Державна Фармакопея України / Державнепідприємство «Українськийнауковийфармакопейний центр якостілікарськихзасобів». – 1-е вид. – Доповнення 4. – Х.: Державнепідприємство Українськийнауковий фармакопейний центр якостілікарськихзасобів». – 2011. – 540 с.
3. Лагвилава Т. О., Зиновьев Е. В., Ивахнюк Г. К. и др. Ранозаживляющие средства на основе карбополов // Известия СПбГТИ (ТУ). – 2013. – № 18 (44). – С. 47–52.
4. Привольнев В. В., Каракулина Е. В. Основные принципы местного лечения ран и раневой инфекции // Клиническая Микробиология и Антимикробная Химиотерапия. – 2011. – Т. 13.– № 3. – С. 214–222.
5. Abbas D. A.Analgesiac, anti-inflammatory and antidiarrhoeal effects of Daturastramoniumhydroalcoholic leaves extract in mice // International Journal of Research and Reviews in Applied Sciences. – 2013. – V. 14 (1). – P. 193199.
6. Al-Sarai A. A. H., Abbas D. A., Al-Rekabi F. M. K. Some toxicological impacts and invitro antibacterial activity ofDaturainnoxiaextract in rats // Kufa Journal For Veterinary Medical Sciences. 2011. V. 2, N 1.  P. 132145.
7. Kumar A., Garg B. R., Rajput G. et al. Antibacterial activity and quantitative determination of protein from leaf of Daturastramonium and Piper betle plants // Pharmacophore. – 2010. – V. 1 (3). – P. 184195.
8. Sakthi S. S., Geetha M., Saranraj P. Pharmacological screening of Daturameteland Acalyphaindicafor its antifungal activity against pathogenic fungi // International journal of pharmaceutical science and health care. – 2011. – V. 2. P. 1530.
9. ShanmugaPriya K., Gnanamani A., Radhakrishnan N., Mary Babu // Healing potential of Daturaalbaon burn wounds in albino rats// Journal of Ethnopharmacology. – 2002. – V. 83. P. 193199.




Рецензии:

13.11.2013, 7:23 Касьянов Захар Вячеславович
Рецензия: Огромным источником новых лекарственных средств остаются растения. Поэтому данная работа является очень актуальной. Статья написана хорошо, четко поставлены проблема, описаны материалы и методики, наглядно представлены результаты, выводы. Из замечаний: в заглавии статьи, на мой взгляд, необходимо было указать "сравнительное ...изучение листьев и семян дурманов индейского и обыкновенного...", иначе непонятно, что с чем сравнивается. Рекомендую статью к публикации. Рецензент: к.фарм.н., Касьянов З.В.

5.01.2014, 18:25 Дудоладова Татьяна Сергеевна
Рецензия: В наше время разработано много ранозаживляющих препоратов на разных основах, но предпочтение отдают растениям и их производным. Поэтому цель и задача работы актуальна. В статье отражена цель, задачи, материалы и методы, четко описаны результаты и выводы. Автору предлогаю провести дальнейшию работы на лабораторных животных и применить препорат для ветеринарных целей. Отзыв подложительный, рекомендую статью к публикации. Рецензент: к.б.н. Дудоладова Т.С.



Комментарии пользователей:

Оставить комментарий


 
 

Вверх