Статья опубликована в №2 (октябрь) 2013
Разделы: Фармацевтика
Размещена 27.09.2013.
Просмотров - 3041

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ДУРМАНА ИНДЕЙСКОГО С ЦЕЛЬЮ РАЗРАБОТКИ НОВОГО РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕГО ГЕЛЯ

Слипченко Галина Дмитриевна

к.фарм.наук, доцент

Национальный фармацевтический университет

доцент

Т.Е. КОЛИСНЫК

Терапия ран и раневой инфекции занимает важное место в современной медицине. Согласно научным представлениям патогенез раневого процесса включает фазу экссудации, фазу пролиферации и фазу эпителизации, что необходимо учитывать при выборе препаратов для местного лечения ран.Так, лекарственные препараты, используемые в экссудативной фазе, должны обладать широким спектром антимикробного действия, осмотическими свойствами, чтобы поглощать раневой экссудат, а также проявлять противовоспалительное и обезболивающее действие. Перспективной лекарственной формой для лечения ран в фазе экссудации являются гели. Посравнениюс мазями, гели обеспечивают интенсивный отток экссудата из глубины раны, имеют pH близкийк pH кожногопокрова, быстроиравномернораспределяютсяпоповерхностипосле нанесения[3, 4].

С целью местного лечения ран широко применяют антимикробные препараты, в частности антибиотики – тетрациклин, левомицетин, гентамицин и др.Их недостатком является ограничение применения из-за индивидуальной непереносимости, а также развитиеустойчивой раневой микрофлоры. Одним из путей решения данной проблемы является использование антимикробных фитопрепаратов на основе календулы, прополиса, зверобоя и др. Для данных лекарственных средствхарактерно сочетание выраженного фармакологического действия с минимальным отрицательным воздействием на организм. К их недостаткам следует отнести отсутствие болеутоляющего действия. В связи с этим особый интерес вызывают растения рода дурман (DaturaL.), обладающие антибактериальными, противогрибковыми, противовоспалительными, а также местноанестезирующими свойствами[5–9].

Поэтому цельюнашей работы является разработка нового ранозаживляющего геля на основе дурмана индейского (DaturainnoxiaMill.). Используядекомпозиционный подход, первымшагом исследований было предварительное фитохимическое изучение листьев и семян дурмана индейского в сравнении с сырьем дурмана обыкновенного − официнального растения Государственной Фармакопеи Украины (ГФУ).

Материалы и методы исследований

Объектами исследований являлись листья и семена видов дурмана индейского и дурмана обыкновенного. Листья заготавливали в июле–августе, а семена – в течение сентября–октября 2012 г.

С помощью общеизвестных химических реакций и методик [1, 2] был проведен сравнительный качественный анализ групп биологически активных веществ (БАВ) листьев и семян дурманов индейского и обыкновенного.

Методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) изучали фенольные соединения и алкалоиды исследуемого сырья.

Для определения фенольных соединений получали водно-спиртовые извлечения по следующей методике. 5,0 г измельченного растительного сырьязаливали 50 мл 50 %-ного спирта и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильникомв течение 20 мин,после чего извлечение охлаждали и фильтровали. 5 мл фильтрата упаривали насухо, сухой остаток растворяли в 0,5 мл 96 % спирта. В качестве неподвижной фазы использовали пластину для ТСХ на алюминиевой фольге Silicagel 60 F₂₅₄ с толщиной слоя силикагеля 0,20 мм и размерами 20х20 см производства фирмы «Merck». Хроматографирование проводили в системе растворителей н-бутанол – уксусная кислота – вода (4:1:2), в качестве веществ-«свидетелей» использовали фармакопейные стандартные образцы (ФСО) рутина и кверцетина. Полученнуюхроматограмму обрабатывали 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида и анализировали в видимом и ультрафиолетовом (УФ) свете с длинами волн 254 и 366 нм.

Определение алкалоидов осуществляли на хроматографической пластинке на алюминиевой фольге AlugramSil G с толщиной слоя силикагеля 0,20 мм и размерами 20х20 см производства фирмы «Macherey-Nagel» по методике, изложенной в статье Государственной Фармакопеи Украины «Дурмана листья» [2].

Количественное содержание суммы флавоноидов определяли методом спектрофотометрии окрашенных комплексов флавоноидов с алюминияхлоридомв пересчетена рутин [1]. Содержание суммы алкалоидов определяли методом обратной алкалиметрии по методике, изложенной в статье Государственной Фармакопеи Украины «Дурмана листья» [2] впересчете на гиосциамин.

Результаты и обсуждение

В табл. 1 приведены результаты сравнительного анализа сырья дурманов индейского и обыкновенного.

Таблица 1

Сравнительный качественный анализ сырья видов дурмана обыкновенного и индейского

Классы БАВ	Реактивы	Лекарственноерастительное сырье
		листья д. обыкно-венного	семена д. обыкно-венного	листья д.индейского	семена д. индейского
Поли-сахариды	96 % этанол	+	+	+	+
Кумарины	лактонная проба	+	+	+	+
Флавоноиды	цианидиновая реакция	+	+	+	+
	раствор железа (III) хлорида	+	+	+	+
Дубильные вещества (конденси-рованные)	раствор железо аммонийных квасцов	+	-	+	-
Алкалоиды	реактив Драгендорфа	+	+	+	+
	раствор кислоты пикриновой	+	+	+	+

Примечание: + - присутствие, − - отсутствие классов БАВ в исследуемом сырье.

Качественный состав классов БАВ сырья исследуемых видов оказался практически идентичным. В листьях и семенах обоих видов дурмана установлено наличие полисахаридов, кумаринов, флавоноидов и алкалоидов; в листьях также обнаружены конденсированные дубильные вещества.На рис. 1 приведена схема ТСХ-хроматограммы фенольных соединений сырья изучаемых видов дурмана.

 

 

Рис. 1. Схема ТСХ-хроматограммы фенольных соединений сырья дурманов обыкновенного и индейского. Обозначения: A – рутин, B – кверцетин, C – семена дурмана обыкновенного, D – семена дурмана индейского, E – листья дурмана обыкновенного, F – листья дурмана индейского; 1−15 – обозначения хроматографических зон

 

На ТСХ-хроматограмме фенольных соединений для листьев дурмановобыкновенного и индейского наблюдали по 3 четкие зоны для каждого вида, для семян − 4 и 3 четкие зоны для дурмана обыкновенного и дурмана индейского соответственно. Окрашиваниехроматографических зон в видимом и ультрафиолетовом свете после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида не изменилось, а лишь приобрело более интенсивный характер.

Данныеотносительно рассчитанных величин коэффициента удержания (R_f) и окрашиванияхроматографических зон в видимом и УФ-свете до и после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида для полученной хроматограммы фенольных соединений представлены в табл. 2.

Таблица 2

Величина R_f и окрашивание хроматографических зон для хроматограммы фенольных соединений

Обозначение хроматографических зон на схеме	Rf	Окрашивание хроматографических зон
		в видимом свете	в УФ-свете 254 нм	в УФ-свете 366 нм
1	0,39	желтое	темно-зеленое	отсутствует
2	0,83	-//-//-	-//-//-	-//-//-
3	0,93	светло-коричневое	-//-//-	сине-зеленая флуоресценция
4	0,84	-//-//-	-//-//-	-//-//-
5	0,43	-//-//-	голубая флуоресценция	ярко-синяя флуоресценция
6	0,34	светло-желтое	желтая флуоресценция	желто-зеленая флуоресценция
7	0,91	светло-коричневое	темно-зеленое	синяя флуоресценция
8	0,82	-//-//-	-//-//-	-//-//-
9	0,53	-//-//-	-//-//-	-//-//-
10	0,92	желто-зеленое	-//-//-	отсутствует
11	0,84	зелено-коричневое	-//-//-	-//-//-
12	0,47	светло-коричневое	-//-//-	-//-//-
13	0,92	желто-зеленое	-//-//-	-//-//-
14	0,84	зелено-коричневое	-//-//-	-//-//-
15	0,46	светло-коричневое	-//-//-	-//-//-

 

По величине R_f и характерухроматографического поведения в сравнении со стандартным веществом в листьях исследуемых видов идентифицированкверцетин. По характерной флуоресценции в УФ-свете до и после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида можно предположить, что хроматографические зоны 5, 6, 7 относятся к кумаринам и/или гидроксикоричным кислотам.

На рис. 2 приведена схема ТСХ-хроматограммы алкалоидов сырья исследуемых видов дурмана.

 

 

Рис. 2. Схема ТСХ-хроматограммы алкалоидов сырья дурманов обыкновенного и индейского. Обозначения: A – смесь ФСО гиосциамина сульфата и скополаминагидробромида, B – листья дурмана индейского, C – листья дурмана обыкновенного,D – семена дурмана индейского,E – семена дурмана обыкновенного; 1−9 – обозначения хроматографических зон

Данные относительно рассчитанных величин R_f и окрашиванияхроматографических зон в видимом свете представлены в табл. 3.

Таблица 3

ВеличинаR_f и окрашиваниехроматографических зон для ТСХ-хроматограммы алкалоидов

Обозначение хроматографической зоны на схеме	Rf	Окрашивание хроматографических зон
		после обработки раствором калия йодовисмутата	после обработки раствором натрия нитрита
1	0,76	оранжевое	оранжевое
2	0,26	коричневое	красно-коричневое
3	0,75	оранжевое	оранжевое
4	0,75	оранжевое	оранжевое
5	0,26	коричневое	красно-коричневое
6	0,76	оранжевое	оранжевое
7	0,26	коричневое	красно-коричневое
8	0,77	оранжевое	оранжевое
9	0,28	коричневое	красно-коричневое

 

По результатам проведенного хроматографического анализа на алкалоиды в сырье дурмана обыкновенного и семенах дурмана индейского идентифицированы гиосциамин и скополамин, в листьях дурмана индейского идентифицированскополамин.

Наибольшее количественное содержание суммы флавоноидов установлено в листьях дурманов обыкновенного и индейского (3,87 ± 0,17 % и 3,20 ± 0,15 % соответственно), наименьшее– в семенах видов дурмана обыкновенного и индейского (1,15 ± 0,12 % и 1,03 ± 0,12 % соответственно) .

Наибольшее содержание суммы алкалоидов установлено в сырье дурмана индейского (0,59 ± 0,03 % и 0,41 ± 0,05 % соответственно для семян и листьев) и несколько меньше – в сырье дурмана обыкновенного (0,28 ± 0,03 % и 0,23 ± 0,02 % соответственно для листьев и семян).

Метрологические характеристики проведенных исследований количественного содержания БАВ в сырье изучаемых видов представлены в табл. 4.

Таблица 4

Метрологические характеристики определения БАВ в сырье дурманов обычного и индейского

Растительное сырье	Параметры
	n	n		s		P	t(P,n)
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
Определение суммы флавоноидов
Листья дурмана обыкновенного	5	4	3,87	0,19	0,09	0,95	2,13	0,39	0,17	4,37
Семена дурмана обыкновенного	5	4	1,15	0,13	0,06	0,95	2,13	0,26	0,12	10,05
Листья дурмана индейского	5	4	3,20	0,17	0,08	0,95	2,13	0,34	0,15	4,70
Семена дурмана индейского	5	4	1,03	0,14	0,06	0,95	2,13	0,27	0,12	11,93

 

Продолжение табл. 4

1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
Определение суммы алкалоидов
Листья дурмана обыкновенного	5	4	0,28	0,03	0,01	0,95	2,13	0,06	0,03	8,89
Семена дурмана обыкновенного	5	4	0,23	0,02	0,01	0,95	2,13	0,05	0,02	8,93
Листья дурмана индейского	5	4	0,41	0,06	0,03	0,95	2,13	0,12	0,05	12,80
Семена дурмана индейского	5	4	0,59	0,04	0,02	0,95	2,13	0,07	0,03	5,52

 

Таким образом, сравнительное фитохимическое изучение сырья видов дурмана обыкновенного и индейского выявило возможность использования сырья дурмана индейского с целью создания новых лекарственных препаратов на его основе.

Выводы

1. Проведено фитохимическое изучение листьев и семян дурмана индейского в сравнении с аналогичным сырьем официнального растения ГФУ – дурмана обыкновенного.

2. Качественное сравнение состава БАВ объектов исследования показало их подобность. С помощью методов ТСХ из фенольных соединений идентифицированкверцетин в листьях исследуемых видов, из алкалоидов определеныгиосциамин  и скополаминв сырье дурмана обыкновенного и семенах дурмана индейского, а также в листьях дурмана индейского – скополамин.

3. По результатам количественного определения отдельных групп БАВ максимальное содержание суммы флавоноидов установлено для листьев дурманов обыкновенного и индейского и наименьшее– для семян обоих видов. Содержание суммы алкалоидов наибольшее для семян и листьев дурмана индейского, и меньшее –для сырья дурмана обыкновенного.

4. На основании проведенных исследований определено перспективное сырье для создания нового ранозаживляющего препарата в форме геля – листья дурмана индейского, ввиду высокого содержания БАВ, а также доступной сырьевой базы, что позволит создать эффективный и экономически целесообразный препарат на основе данного сырья.

1. Государственная фармакопея СССР XI издание. Вып. 1, 2. – М.: Медицина, 1987, 1990. – 335 с., 400 с.
2. Державна Фармакопея України / Державнепідприємство «Українськийнауковийфармакопейний центр якостілікарськихзасобів». – 1-е вид. – Доповнення 4. – Х.: Державнепідприємство Українськийнауковий фармакопейний центр якостілікарськихзасобів». – 2011. – 540 с.
3. Лагвилава Т. О., Зиновьев Е. В., Ивахнюк Г. К. и др. Ранозаживляющие средства на основе карбополов // Известия СПбГТИ (ТУ). – 2013. – № 18 (44). – С. 47–52.
4. Привольнев В. В., Каракулина Е. В. Основные принципы местного лечения ран и раневой инфекции // Клиническая Микробиология и Антимикробная Химиотерапия. – 2011. – Т. 13.– № 3. – С. 214–222.
5. Abbas D. A.Analgesiac, anti-inflammatory and antidiarrhoeal effects of Daturastramoniumhydroalcoholic leaves extract in mice // International Journal of Research and Reviews in Applied Sciences. – 2013. – V. 14 (1). – P. 193199.
6. Al-Sarai A. A. H., Abbas D. A., Al-Rekabi F. M. K. Some toxicological impacts and invitro antibacterial activity ofDaturainnoxiaextract in rats // Kufa Journal For Veterinary Medical Sciences. 2011. V. 2, N 1.  P. 132145.
7. Kumar A., Garg B. R., Rajput G. et al. Antibacterial activity and quantitative determination of protein from leaf of Daturastramonium and Piper betle plants // Pharmacophore. – 2010. – V. 1 (3). – P. 184195.
8. Sakthi S. S., Geetha M., Saranraj P. Pharmacological screening of Daturameteland Acalyphaindicafor its antifungal activity against pathogenic fungi // International journal of pharmaceutical science and health care. – 2011. – V. 2. P. 1530.
9. ShanmugaPriya K., Gnanamani A., Radhakrishnan N., Mary Babu // Healing potential of Daturaalbaon burn wounds in albino rats// Journal of Ethnopharmacology. – 2002. – V. 83. P. 193199.

Рецензии:

13.11.2013, 7:23 Касьянов Захар Вячеславович
Рецензия: Огромным источником новых лекарственных средств остаются растения. Поэтому данная работа является очень актуальной. Статья написана хорошо, четко поставлены проблема, описаны материалы и методики, наглядно представлены результаты, выводы. Из замечаний: в заглавии статьи, на мой взгляд, необходимо было указать "сравнительное ...изучение листьев и семян дурманов индейского и обыкновенного...", иначе непонятно, что с чем сравнивается. Рекомендую статью к публикации. Рецензент: к.фарм.н., Касьянов З.В.

5.01.2014, 18:25 Дудоладова Татьяна Сергеевна
Рецензия: В наше время разработано много ранозаживляющих препоратов на разных основах, но предпочтение отдают растениям и их производным. Поэтому цель и задача работы актуальна. В статье отражена цель, задачи, материалы и методы, четко описаны результаты и выводы. Автору предлогаю провести дальнейшию работы на лабораторных животных и применить препорат для ветеринарных целей. Отзыв подложительный, рекомендую статью к публикации. Рецензент: к.б.н. Дудоладова Т.С.



Комментарии пользователей:

Оставить комментарий